(1)使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
(2)引物:引物不局限于单条引物,可多条引物同时添加进行多重PCR,通常每条引物终浓度可以根据情况在100-500nM间进行调整;
(3)探针:探针可包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-250 nM间调整;
(4)模板:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用。若模板为cDNA原液,则模板体积不超过总体积的1/10;
(5)反应体积:推荐使用25 uL、30 uL或50 uL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性;